产品货号：
KD0711
中文名称：
20%尿素-PAGE制胶液(DNA，microRNA)
英文名称：
20% Urea-PAGE Gel solution
产品规格：
500mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
| 组分 | 规格 | 保存 |
| 20%尿素-PAGE制胶液 | 500mL | 2～8℃ |
| APS | 3×0.1g | RT |
| TEMED | 1mL | RT，避光 |
保存：4℃，有效期1年。
- 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8mm的胶需要120mL凝胶溶液。
- 过硫酸铵(APS)为固体粉末，使用前配制成10% APS溶液(0.1g APS加1mL双蒸水)。APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存一周，-20℃能保存半年。
操作步骤：
- 取适量的制胶液于三角瓶中，边摇晃溶液边加入TEMED和10%过硫酸铵。(建议每100mL的加入量：10% APS 500μL，50～100μL的TEMED)
- 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳，室温放置30～60分钟等待胶凝固。
- 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×TBE电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
- 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
- 在上样前，预电泳20～30分钟以使多余的过硫酸铵跑出加样空，同时还可以使凝胶的温度升高(到50℃左右)，有利于RNA变性状态。
- 将miRNA样品与等体积的miRNA上样液混合，70℃保温2～3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。
- 关电泳仪后开始上样。
- 重开电泳仪，对13cm×15cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对36cm×45cm的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。
- 染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加20μL 10mg/mL的EB溶液)。UV下观察并拍照。
- miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
- Northern杂交：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
- 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。
Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择：
| 15%/20% PAGE成分： 40% Acr/Bis(19:1) 187.5mL/250mL Urea 7M (干粉210g) 10×TBE 50mL 补足DEPC水至500mL过滤避光保存。 |
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